اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC یک فرآیند تحلیلی پیچیده است که هدفش شناسایی دقیق اسیدهای آمینه در یک نمونه خاص است. این کار معمولاً برای تحقیقات بیوشیمیایی، تشخیص بالینی و کنترل کیفیت در مواد غذایی و دارویی انجام می‌شود. امروزه استفاده از دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا یا همان HPLC محبوییت زیادی پیدا کرده است و صنایع از آن برای اندازه گیری و آنالیز آمینو اسیدها در محصولات تولیدی خود استفاده می‌کنند. در این مقاله از وبسایت «رسوب آب» به مزایای آزمون اندازه گیری اسیدهای آمینه با دستگاه HPLC و نحوه انجام آن صحبت می‌کنیم.
پروفایل اسید آمینه چیست؟
پروفایل اسید آمینه (Amino Acid) به ترکیب و غلظت هر یک از انواع آمینو اسید موجود در یک منبع پروتئین اشاره دارد. پروتئین‌ها از زنجیره‌ای از اسیدهای آمینه تشکیل شده‌اند. از طرفی، حدود 20 اسید آمینه مختلف وجود دارند که در پروتئین‌ها یافت می‌شوند. اسیدهای آمینه را می‌توان به دو دسته ضروری و غیر ضروری طبقه بندی کرد. آمینو اسیدهای ضروری آنهایی هستند که بدن به تنهایی قادر به تولید آنها نیست و باید از طریق رژیم غذایی یا مکمل به دست آید. از طرف دیگر، آمینو اسیدهای غیر ضروری می‌توانند توسط بدن سنتز شوند. با استفاده از دستگاه HPLC می‌تواند آمینو اسیدهای زیر را اندازه گیری کرد:
| اسیدهای آمینه ضروری | اسیدهای آمینه غیر ضروری |
| هیستیدین | آلانین |
| ایزولوسین | آسپاراژین |
| لوسین | آسپارتیک اسید |
| لیسین | سیستئین |
| متیونین | گلوتامیک اسید |
| فنیل آلانین | گلوتامین |
| ترئونین | گلیسین |
| تریپتوفان | پرولین |
| والین | سرین |
مزایای اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC
با اندازه گیری اسیدهای آمینه با دستگاه HPLC می‌توان درک کرد که چه نوع اسید آمینه‌هایی و با چه غلظتی در مواد غذایی یا مکمل‌های ورزشی وجود دارد. این آزمایش به عنوان راهی برای کنترل کیفیت محصولات خوراکی و تعیین غلظت هر کدام از اسیدهای آمینه لازم است. از مزایای اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا می‌توان به موارد زیر اشاره کرد:
- دقت بالا: اسیدهای آمینه را در یک نمونه با دقت بالا اندازه گیری می‌کند. خطاها را به حداقل می‌رساند و نتایج قابل اعتمادی ارائه می‌دهد.
- قابلیت جداسازی: اسیدهای آمینه را بر اساس خواص شیمیایی جدا می‌کند. همچنین امکان شناسایی و تعیین کمیت هر اسید آمینه را به صورت جداگانه فراهم خواهد کرد.
- حساسیت بالا: این دستگاه می‌تواند غلظت‌های پایین اسیدهای آمینه را تشخیص دهد و برای آنالیز نمونه‌هایی با مقادیر کم پروتئین مفید باشد.
- سرعت بالا: نمونه‌ها با سرعت بالایی پردازش می‌شوند و امکان آنالیز در کمترین زمان وجود دارد. این موضوع در زمان تعداد نمونه‌ها زیاد است، مفید خواهد بود.
- تکرارپذیری: این دستگاه نتایج ثابت و قابل تکرار را ارائه می‌دهد. این قابلیت برای مقایسه داده‌ها در تست‌ها یا مطالعات آزمایشگاهی اهمیت بالایی دارد.
- تطبیق پذیری: این آزمایش طیف وسیعی از اسیدهای آمینه از جمله اسیدهای آمینه معمولی و نادر را تجزیه و تحلیل کند و یک پروفایل آمینو اسید جامع ارائه دهد.
- آنالیز خودکار: بسیاری از دستگاه‌های HPLC مجهز به قابلیت‌های اتوماسیون، کاهش کار دستی و بهبود کارایی برای رسیدن به نتایج مورد نظر هستند.
نحوه اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC
در ادامه به مراحل اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا در آزمایشگاه مواد غذایی اشاره می‌کنیم:
1- آماده سازی نمونه
اولین مرحله در اندازه گیری آمینو اسیدها آماده سازی نمونه است. این مرحله شامل استخراج پروتئین‌ها از نمونه اغلب از طریق هیدرولیز خواهد بود. هیدرولیز می‌تواند پروتئین‌ها را به اسیدهای آمینه تشکیل دهنده آنها تجزیه کند. در فرآیند هیدرولیز از اسیدهایی مانند اسید هیدروکلریک استفاده می‌شود و همچنین برای اطمینان از تجزیه کامل نیاز به حرارت دارد. نمونه بعد از هیدرولیز فیلتر شده و تا غلظت مناسب برای آنالیز HPLC رقیق می‌شود.
2- مشتق سازی
مشتق سازی (Derivatization) برای افزایش تشخیص اسیدهای آمینه انجام می‌شود. مشتق سازی شامل اصلاح شیمیایی اسیدهای آمینه به منظور تشخیص بیشتر آنها با دستگاه HPLC است. روش‌های مشتق سازی رایج شامل استفاده از معرف‌هایی مانند o-phthaldialdehyde (OPA) یا 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (FMOC) هستند که با اسیدهای آمینه واکنش می‌دهند و مشتقات فلورسنت یا فعال UV (اشعه فرابنفش) تشکیل می‌دهند.
3- راه اندازی HPLC
مرحله بعدی در اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC به راه اندازی دستگاه مربوط می‌شود. این دستگاه شامل یک پمپ برای تحویل فاز متحرک، یک انژکتور برای معرفی نمونه، یک ستون کروماتوگرافی برای جداسازی و یک آشکارساز برای شناسایی و تعیین کمیت اسیدهای آمینه است. ستون کروماتوگرافی معمولاً یک فاز ثابت دارد که اجزای درون لوله یا شبکه جداسازی را تشکیل می‌دهد. فاز متحرک، حلال یا مخلوطی از حلال‌هاست که حرکت اسیدهای آمینه را در ستون تسهیل می‌کند.
4- جداسازی کروماتوگرافی
بعد از راه اندازی دستگاه، نوبت انجام تست است. نمونه آماده شده به سیستم HPLC تزریق می‌شود و در آنجا از ستون عبور می‌کند. اسیدهای آمینه بر اساس برهمکنش آنها با فاز ثابت و تمایل آنها به فاز متحرک از همه جدا می‌شوند. همانطور که هر اسید آمینه از ستون خارج می‌شود، توسط آشکارساز HPLC شناسایی خواهد شد. جداسازی به هر یک از اسیدهای آمینه اجازه می‌دهد تا تجزیه شده و غلظت آنها مشخص شود.
5- تجزیه و تحلیل داده‌ها
پس از جداسازی، آشکارساز داده‌هایی را تولید می‌کند که به عنوان کروماتوگرام ثبت می‌شوند. کروماتوگرام نمایش گرافیکی غلظت اسیدهای آمینه در طول زمان است. پیک‌ها (قله‌ها) در کروماتوگرام مربوط به اسیدهای آمینه مختلف هستند که اندازه آنها نشان دهنده غلظت‌شان است. تجزیه و تحلیل داده‌ها شامل مقایسه این پیک‌ها با استانداردهای شناخته شده برای شناسایی و تعیین کمیت اسیدهای آمینه موجود در نمونه آزمایشی است.
6- کالیبراسیون و اعتبارسنجی
درنهایت، کالیبراسیون و اعتبارسنجی برای اندازه گیری دقیق ضروری است. کالیبراسیون شامل ایجاد یک منحنی استاندارد با استفاده از غلظت‌های شناخته شده اسیدهای آمینه برای اطمینان از صحت انجام آزمایش است. اعتبارسنجی می‌تواند دقت، صحت و قابلیت اطمینان روش HPLC را بررسی کند. این مرحله تضمین می‌کند که نتایج با استانداردها مطابقت دارند و درصد آمینو اسیدها در محصول خوراکی در مقدار تعیین شده است.
نکات مهم در آزمون اندازه گیری اسیدهای آمینه با دستگاه HPLC
برای افزایش کیفیت تست توصیه می‌کنیم نکات زیر را در اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC در نظر بگیرید:
- سیستم HPLC را به طور منظم کالیبره کنید تا نتایج دقیق دریافت کنید.
- پمپ دستگاه را از نظر میزان جریان و فشار ثابت بررسی کنید.
- مطمئن شوید که انژکتور حجم دقیق نمونه را تحویل می‌دهد.
- کارایی ستون را با اندازه گیری وضوح و تقارن در پیک ارزیابی کنید.
- از تمیز بودن تمامی قطعات و لوله را اطمینان پیدا کنید.
- حساسیت و دقت در پاسخ آشکارساز را بررسی کنید.
- ببینید نرم افزار مورد استفاده برای آنالیز داده‌ها به درستی پیکربندی شده است.
- بررسی کنید که سیستم کنترل دما پایدار و سازگار است.
اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC در آزمایشگاه رسوب آب
اندازه گیری پروفایل اسید آمینه با دستگاه HPLC می‌تواند به شما کمک کند تا غلظت آمینو اسیدهای مختلف را در مواد خوراکی مشخص کنید. دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا به دلیل ویژگی‌های منحصر به فردی که دارد، امکان رسیدن به نتایج دقیق را میسر می‌کند. نه تنها کیفیت دستگاه بلکه امکانات آزمایشگاه نیز در بررسی دقیق نمونه‌های تستی اهمیت زیادی دارد. ما در رسوب آب با داشتن آزمایشگاه‌های پیشرفته و مجرب به شما بهترین خدمات را در اندازه گیری اسیدهای آمینه با استفاده از HPLC ارائه می‌دهیم. برای کسب اطلاعات بیشتر با تیم مشاوران ما از طریق شماره ۷۷۶۴۶۱۰۲-۰۲۱ تماس بگیرید.